In situ ハイブリダイゼーション法によるmRNAの検出 : 特に脳組織を対象として (テクニカルノート)

Title

Creators 藤永竜太郎

Creators 柳井章江

Creators 國分啓司

Creators 篠田晃

Source Identifiers

Creator Keywords

ジゴキシゲニン RNAプローブアルカリフォスファターゼ stringency 組織化学

In situ hybridization(ISH)法は,組織切片,細胞,染色体に存在する特定の核酸シークエンスの局在を検出する方法であり,本稿では,ジゴキシゲニン標識cRNAプローブを用いた脳凍結切片上でのmRNA検出方法について紹介する.ISH法は,対象となる組織の形態を保持した状態でmRNA発現部位を可視化するため,特に脳などの高度に不均一な組織を扱うときには有利である.最初にISHを行うときは,次に示す事項に注意するとよい:1)適切なプローブのデザイン,2)浮遊法によるハイブリダイゼーション,3)アルカリフォスファターゼ発色系の使用,4)stringencyの条件検討.つまり,感度をよくするために長鎖プローブとアルカリフォスファターゼ発色系を用いた浮遊法ISHを行い,ハイブリダイゼーションの温度条件をコントロールすることで特異的かつ安定したデータが得られる.今回紹介するISH法を基本として,二重染色,動物胚を用いたホールマウントISH,電子顕微鏡への応用なども可能である.

Subjects

医学 ( Other)

Languages jpn

Resource Type journal article

Publishers 山口大学医学会

Date Issued 2014-05-01

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Access Rights open access

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[ISSN]0513-1731

[NCID]AN00243156

Schools 大学院医学系研究科（医学）